医院医院提供消毒灭菌服务的消毒服务机构。监测方法有以下A.附录A压力蒸汽灭菌器的生物监测方法

在之前的文章GB-消毒与灭菌效果的评价方法与标准第一篇压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准有介绍（放链接）。

B.附录B干热灭菌的生物监测方法

1.标准生物测试管的制作方法

按照WS/T的规定，将枯草杆菌黑色变种芽孢菌片装入无菌试管内（1片/管），制成标准生物测试管。生物指示物应符合国家相关管理要求。

2.监测方法

将标准生物测试管置于灭菌器与每层门把手对角线内、外角处，每个位置放置2个标准生物测试管，试管帽置于试管旁，关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至80℃左右时，加盖试管帽后取出试管。在无菌条件下，每管加入5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB），36℃±1℃培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7日。检测时以培养基作为阴性对照，以加入芽孢菌片的培养基作为阳性对照。

3.结果判定

阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，若每个测试管的肉汤培养均澄清，判为灭菌合格；若阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，而只要有一个测试管的肉汤培养混浊，判为不合格；对难以判定的测试管肉汤培养结果，取0.1mL肉汤培养物接种于营养琼脂平板，用灭菌棒或接种环涂匀，置36℃±1℃培养48h，观察菌落形态，并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长，若有指示菌生长，判为灭菌不合格；若无指示菌生长，判为灭菌合格。

C.附录C环氧乙烷灭菌的生物监测方法

1.常规生物测试包的制备

取一个20mL无菌注射器，去掉针头，拔出针栓，将枯草杆菌黑色变种芽孢生物指示物放入针筒内，带孔的塑料帽应朝向针头处，再将注射器的针栓插回针筒（注意不要碰及生物指示物），之后用一条全棉小毛巾两层包裹，置于纸塑包装袋中，封装。生物指示物应符合国家相关管理要求。

2.监测方法

将常规生物测试包置于灭菌器最难灭菌的部位（所有装载灭菌包的中心部位）。灭菌周期完成后应立即将生物测试包从被灭菌物品中取出。自含式生物指示物遵循产品说明书进行培养；如使用芽孢菌片的，应在无菌条件下将芽孢菌片接种到含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）的无菌试管中，36℃±1℃培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7日。检测时以培养基作为阴性对照（自含式生物指示物不用设阴性对照），以加入芽孢菌片的培养基作为阳性对照。

3.结果判定

阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致。

D.附录D过氧化氢低温等离子灭菌的生物监测方法

1.管腔生物PCD或非管腔生物监测包的制作

采用嗜热脂肪杆菌芽孢生物指示物制作管腔生物PCD或非管腔生物监测包；生物指示物的载体应对过氧化氢无吸附作用，每一载体上的菌量应达到1×CFU，所用芽孢对过氧化氢气体的抗力应稳定并鉴定合格；所用产品应符合国家相关管理要求。

2.管腔生物PCD的监测方法

灭菌管腔器械时，可使用管腔生物PCD进行监测，应将管腔生物PCD放置于灭菌器内最难灭菌的部位（按照生产厂家说明书建议，远离过氧化氢注入口，如灭菌舱下层器械搁架的后方）。灭菌周期完成后立即将管腔生物PCD从灭菌器中取出，生物指示物应放置56℃±2℃培养7d（或遵循产品说明书），观察培养结果。并设阳性对照和阴性对照（自含式生物指示物不用设阴性对照）。

3.非管腔生物监测包的监测方法

灭菌非管腔器械时，应使用非管腔生物监测包进行监测，应将生物指示物置于特卫强材料的包装袋内，密封式包装后，放置于灭菌器内最难灭菌的部位（按照生产厂家说明书建议，远离过氧化氢注入口，如灭菌舱下层器械搁架的后方）。灭菌周期完成后立即将非管腔生物监测包从灭菌器中取出，生物指示物应放置56℃±2℃培养7d（或遵循产品说明书），观察培养结果。并设阳性对照和阴性对照（自含式生物指示物不用设阴性对照）。

4.结果判定

阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，实验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，实验组培养阳性，判定为灭菌失败；同时应进一步鉴定实验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致。

其它相关标准有GB医院消毒卫生标准，GB/T20医疗保健产品灭菌医疗保健机构湿热灭菌的确认和常规控制要求，GB/T小型压力蒸汽灭菌器灭菌效果监测方法和评价要求，WS.1医院消毒供应中心第1部分：管理规范，WS.2医院消毒供应中心第2部分：清洗消毒及灭菌技术操作规范，WS/T医疗机构消毒技术规范。

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